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| 掌握培養基制備、滅菌及無菌檢測技術的過程和方法 | |||
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一、實驗目的
1.了解培養基的配置原理
2.掌握其制備過程和方法
二、實驗原理
培養基是人們按照不同微生物生長繁殖或積累代謝產物的需要而配置的營養基質。用于微生物的分離純化培養鑒定和保存菌種。培養基的種類有很多，按對培養基的組成物質的化學成分是否完全了解可以分為天然培養基和合成培養基。按照不同微生物對營養的要求，選擇可被迅速利用的碳源、氮源、無機鹽及其他營養成分可制成不同的培養基。
三、實驗器材
1.牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、NaCI、K2HPO4、KNO3、MgSO4FeSO4馬鈴、蔗糖、瓊脂、10%NaOH和10%HCI。
2.刻度搪瓷杯、天平、牛角匙、小燒杯、稱量紙、分裝漏斗、試管、棉花、鐵絲筐、電爐、玻棒、紗布。
四、實驗操作
1.稱量：按照培養基配方，準確稱取各種成分。
?。?）牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基
牛肉膏 3克 蛋白胨 5克
NaCl 5克 瓊脂15-20克
水 1000毫升
PH調至7.2-7.4 0.1MPa壓力下滅菌30分鐘
?。?）馬鈴薯蔗糖瓊脂培養基（PDA）
馬鈴薯 200克 蔗糖(白糖) 20克
瓊脂 15-20克 水1000毫升
去皮洗凈的馬鈴薯按量稱取，切成小塊，放在水中煮沸，并維持20一30分鐘，用雙層紗布過濾得馬鈴薯汁，補足到定量的水。自然pH值0.1MPa壓力下滅菌30分鐘。
?。?）高氏一號培養基
可溶性淀粉 20克 KNO3 1克 K2HPO4'3H2O 0.5克 NaCl 0.5克 MgSO4'7H2O 0.5克 FeSO4'7H2O
pH調至7.2~~7.4先用少量的水將淀粉調成糊狀后再加水和其他的鹽類。0.1MPa壓力下滅菌30分鐘
2.溶化：
依配方順序，用少量的水溶解各成分，有時需加熱溶化，最后補足所需水量。在暴沸時添加少量的水抑制沸騰，融化過程需不斷攪拌。
3.調整pH：
用PH試紙或酸酸度計先試測初制備培養基的的PH值，然后用10%NaOH或10%HCⅠ調整至所需的pH范圍。
4.過濾：
在配制固體培養基時，事先將瓊脂稱好用冷水浸泡，洗凈擠干后加人液體培養基中，瓊脂融化的過程中，需不斷攪拌，并控制火力，不要使培養基溢出或燒焦，待完全融化后，補足水分。
5.分裝：根據不同的需要，可將配制的培養基分裝在試管或三角瓶內，注意不要將培養基沾染在管口和瓶口上，以免粘住棉塞，引起污染。
6.裝棉塞或硅晈塞，棉塞粗細、長短要求合適，外面再包一層報紙避免造成污染。
7.滅菌：
培養基的滅菌時間和溫度，需按各種規定進行，保證滅菌數果和不損失培養基的必要成分。滅菌后的培養基要趁熱擺成斜面，半固體要垂直放置，待冷卻即可成為斜面培養基和半固體深層瓊脂培養基，而且必須放在37℃溫箱培養24小時，無菌生長方可使用。
五、注意事項
1.牛肉膏的稱取：
用玻璃棒蘸取適量牛肉膏，抹于稱量紙上，勿取過量，不足時，再蘸取少量，逐步添加；然后將牛肉膏連同稱量紙放入水中，稍等片刻牛肉膏即從稱量紙上脫落，用玻璃棒將紙撈出即可。
2.加瓊脂：
瓊脂一般應在調好了pH后加入，瓊脂的加入不會影響pH，加入瓊脂后要控制火力并不斷攪拌，以免沸騰溢出或瓊脂糊底燒焦。加熱過程中因水分蒸發而可能使體積減小，應補充水分至所需量。
3.滅菌前一定要用報紙包扎好。
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