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| 溶血標本可能會增加非特異性顯色 | |||
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防止溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為標記的ELISA 測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP也會發生假陽性反應。一般說來，5天內測定的血清標本可放置于4℃，標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深。逾越一周測定的需-20℃保存。凍結血清融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻并防止發生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾，廓清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保管作多次檢測，宜少量分裝冰存。保管血清自采集時就應注意無菌操作，也可加入適當防腐劑。
要注意防止出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，以HRP為標記酶的ELISA 測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
樣本的采集及血清分離中要注意盡量防止細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發生分解作用;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌β-半乳糖苷酶自身會對用相應酶作標記的測定方法發生非特異性干擾。血清標本如是以無菌操作分離，則可以在28℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保管。樣本的長時間保存，應在-70℃以下。
冰凍保管的血清標本須注意防止因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可標本在保管中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測
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