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| 測定開光復明丸中黃芩苷的含量實驗 | |||
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1 儀器與試藥
1.1 儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀;VWD紫外檢測器;AX205梅特勒-托利多電子分析天平;KQ-300VDB超聲波清洗器。
1.2 試藥 甲醇為色譜純，水為超純水，磷酸(分析純)(為北京化工廠生產)。黃芩苷對照品(批號110715-200514，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所提供)。開光復明丸三批(批號6013864;6013865;6013866)，中國北京同仁堂(集團)有限責任公司北京中藥二廠。
2 實驗方法與結果
2.1 溶液的制備
2.1.1 對照品溶液 精密稱取黃芩苷對照品10.06mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含黃芩苷0.04024mg)。
2.1.2 供試品溶液 取重量差異項下的本品，剪碎，取約0.5g，精密稱定，置50ml量瓶中，加入70%乙醇適量，密塞，超聲處理(功率300W，頻率40kHz)30min，放冷至室溫，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密吸取續濾液2ml，置10ml量瓶中，用70%乙醇稀釋至刻度，即得。
2.1.3 陰性樣品溶液 按處方比例，取不含黃芩成分的陰性制劑，同供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。
2.2 色譜條件[2] 色譜柱：ZORBAX SB-C18 (250mm×4.6mm，5μm)分析柱;流動相：甲醇-水-磷酸(50：50：0.2);檢測波長：277nm;流速1.0ml/min;柱溫：40℃。分別取黃芩苷對照品溶液、供試品溶液(批號：6013864)、陰性對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測得的分離色譜圖如圖1顯示。結果表明，黃芩苷與其他成分分離良好，不干擾測定，測得理論塔板數按黃芩苷峰計算不低于2500，黃芩苷峰與相鄰峰的分離度大于1.5，符合要求。
1.黃芩苷
圖1 HPLC色譜圖2.3 線性關系 精密稱取黃芩苷對照品適量，加甲醇溶解并制成每1ml含0.2012mg溶液，作為儲備液。分別精密量取對照品儲備溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml置于10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。分別精密吸取上述對照品溶液10μl，注入液相色譜儀，按正文所述色譜條件測定峰面積，以進樣量(μg)為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，進行回歸處理。得黃芩苷回歸方程：Y=29.59708249X-69.11618323, r=0.9991 ,n=6，表明黃芩苷在0.1005~0.8048μg范圍內有良好的線性關系。
2.4 回收率試驗 稱取已知含量的同一批樣品(批號6013864，含量為3.927mg/g)約0.3g(6份)，精密稱定，分別精密加入黃芩苷對照品溶液(0.04312mg/ml)各25ml，按供試品溶液制備及上述色譜條件操作，依法制備、進樣、記錄色譜圖、計算回收率，結果見表1。表1 開光復明丸中黃芩苷加樣回收測定結果
2.5 穩定性試驗 精密稱取供試品(批號6013864)0.5060g ，照正文所述方法制備供試品溶液，照上述色譜條件，分別在0、1、4、9、20、24h依法測定，記錄峰面積，結果峰面積的RSD%=1.2%(n=6)。表明在24h內基本穩定，本方法有良好的穩定性。
2.6 精密度試驗 取供試品溶液，按上述色譜條件重復進樣6次，峰面積的RSD%=2.59%(n=6)。
2.7 供試品含量測定 精密吸取黃芩苷對照品溶液和供試品溶液各10μl，按上述色譜條件測定，以外標法計算樣品中黃芩苷的含量，共測定3批供試品。結果見表2。表2 供試品含量測定結果www.atcc360.com
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