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| 在特定的培養基中細菌種類有其特征性的生長表現 | |||
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每一種微生物都有其特殊的生物學特性，細菌在適宜的生長條件下，在特定的培養基中有其特征性的生長表現，可作為鑒定細菌種類的依據。
[目的要求]
(1)了解細菌的菌落形態及其在各種培養基上的生長表現。
(2)了解培養性狀對細菌鑒別的重要意義。
(3)掌握檢查細菌運動力的幾種方法。
(4)區別細菌的真正運動和受外力作用的擺動或移動。
[實驗材料]
(1)葡萄球菌、炭疽桿菌、巴氏桿菌、豬丹毒桿菌的普通平板或鮮血(血清)平板、斜面、瓊脂穿刺及明膠穿刺培養物。
(2)馬鏈球菌馬亞種、綠膿桿菌、葡萄球菌、大腸桿菌(Escherichia coli)、炭疽桿菌的肉湯培養物，厭氧梭菌的熟肉培養基培養物。
(3)大腸桿菌(Escherichia coli)、葡萄球菌的半固體穿刺培養物。
(4)凹玻片、凡士林等。
[細菌在固體培養基上的生長表現]
1．瓊脂平板上的生長表現細菌在固體培養基表面生長繁殖，可形成肉眼可見的菌落。各種細菌的菌落，按其特征的不同，可以在一定程度上進行鑒別。例如，葡萄球菌在瓊脂平皿上，由于產生色素的不同，形成各種顏色的圓形而突起的菌落；炭疽桿菌形成扁平、干燥、邊緣不整齊的波紋狀菌落，用放大鏡觀察時，呈卷發樣；腸道桿菌屬的細菌，形成圓形、濕潤、黏稠、扁平、大小不等之菌落；巴氏桿菌和豬丹毒桿菌，形成細小露珠狀菌落。菌落的觀察方法除肉眼外，可用放大鏡，必要時也可用低倍顯微鏡進行檢查。觀察的主要內容有：
大小菌落的大小，規定用毫米(mm)表示，一般不足1mm者為露滴狀菌落，1～2mm者為小菌落；2～4mm者為中等大菌落；4～6mm或更大者稱為大菌落、巨大菌落。
形狀菌落的外形有圓形、不正形、根足形、葡萄葉形。
邊緣菌落邊緣有整齊、鋸齒狀、網狀、樹葉狀、蟲蝕狀、放射狀等。
表面性狀觀察其表面平滑、粗糙、皺襞狀、旋渦狀、荷包蛋狀，甚至有子菌落等(圖6-1)。
隆起度表面有隆起、輕度隆起、中央隆起，也有陷凹或堤狀者(圖6—2)。
顏色及透明度菌落有無色、灰白色，有的能產生各種色素；菌落是否光澤、透明、
透明及不透明。
硬度黏液狀、膜狀、干燥或濕潤等。
溶血若是鮮血瓊脂平皿，應看其是否溶血，溶血情況怎樣。
2．瓊脂斜面上生長表現將各種細菌分別以接種針直線接種于瓊脂斜面上(自底部向上劃一直線)，培養后觀察其生長表現，如圖6—3所示各種生長方式。
3．瓊脂柱穿刺培養中的生長表現將各種細菌分別以接種針穿刺接種于瓊脂柱中，培養后觀察其生長表現，如圖6—4所示各種生長方式。
[細菌在明膠穿刺培養中的生長表現]
取大腸桿菌(Escherichia coli)、枯草桿菌和其他多種細菌分別以接種針穿刺接種于明膠柱，置22℃溫箱中培養后觀察其液化與否和液化的情況。細菌對明膠柱的液化作用，其形式如圖6—5所示。
[細菌在液體培養基中的生長表現]
1．肉湯中生長表現將馬鏈球菌馬亞種、綠膿桿菌、葡萄球菌、大腸桿菌(Escherichia coli)、炭疽桿菌等分別接種于肉湯中，培養后觀察其生長情況，注意其混圖6—5細菌明膠柱穿刺培養生長表現濁度、沉淀物、菌膜、菌環和顏色等(圖6—6)。
細菌在肉湯中所形成的沉淀有：顆粒狀沉淀、黏稠沉淀、絮狀沉淀、小塊狀沉淀。另外還有不生成沉淀的菌種。
2．細菌在熟肉培養基中生長表現取各種厭氧梭菌分別接種于熟肉培養基中，培養后觀察其生長表現，注意其混濁度、沉淀、碎肉的顏色和碎肉塊被消化的情況。
[細菌運動力的檢查]
1．顯微鏡直接檢查法一部分細菌具有運動能力，可以獨立運動；另一些細菌則沒有運動的性能。在顯微鏡下觀察，細菌的真正運動(自動運動)表現為能離開原來位置，不斷改變方向的自由地游動。水的分子運動(布朗運動)也能見于細菌個體，使其在原地擺動，但不能遠離原來位置移動。這種情況，都是外力作用的結果，不是細菌本身的真正運動。檢查細菌的運動力，應用幼年培養物，最好剛從溫箱中取出，并在溫暖的環境下從速進行。
懸滴檢查法
制片：取潔凈的凹玻片一塊，于其凹窩的四周整齊地涂以適量的凡士林。另取潔凈蓋玻片一塊，用接種環于其中央滴上一小滴生理鹽水或透明肉湯，再用接種環取待檢固體培養物少量(不要過多)，混勻于液滴內；如為液體檢材，可直接用接種環取一滴于蓋玻片上，取起并翻轉蓋玻片，使液滴向下，以其對角線垂直于載玻片四邊的位置，輕輕蓋在凹玻片的凹窩上，略加輕壓，使蓋玻片四周與凡士林密著，封閉凹窩，即可進行鏡檢(或者將載玻片取起翻轉，使凹窩對正蓋玻片上液滴罩下，輕壓，使與凡士林密著，封閉凹窩，并粘著蓋玻片，然后再將玻片一起翻轉，即可進行鏡檢)。
用凡士林封閉凹窩的主要目的，在于防止液滴干燥，可供較長時間觀察；而使蓋玻片如上述位置放置，則便于放上和取下，如用蠟筆劃好分格，則可在一塊蓋玻片上作2～3個懸滴點(如只作短時間觀察，亦可不用凡土林，而在凹窩四周以水濕潤，甚至水也不用，光是蓋上蓋玻片即用)，如圖（6-7）所示。
鏡檢：顯微鏡要放在平坦、穩固之處，不能傾斜或震動，放上懸滴標本片后，先用低倍鏡找到液滴，移至視野中央，然后轉換高倍鏡和調整光線(宜稍暗)，對焦觀察，一般不必使用油鏡觀察，必須用時，注意防止壓壞蓋玻片。
壓滴檢查法本法比較簡便，宜于短時觀察，也較適用于混濁或濃厚的液體檢材(如血液、滲出液、膿汁、稀糞便等)。
制片：取一塊潔凈的普通載玻片，于其中央滴上一滴(可以稍大些)生理鹽水，以接種環取少量固體檢材混勻其中。如為液體檢材，可以直接滴在載玻片上，然后取一個潔凈的蓋玻片，輕輕蓋壓在液滴上，要注意避免產生氣泡。
鏡檢：同懸滴檢查法。
暗視野檢查法
制片：與壓滴檢查法同，但只能應用不超過1.5mm厚度的薄載玻片，否則暗視野集光器的斜射光交點，將不能調整至標本液滴中，而只能落在下面(載玻片內)，這就不能觀察運動標本的影像。
鏡檢：暗視野鏡檢方法見實驗一。
2．培養檢查法
(1)半固體培養基穿刺培養法：以滅菌接種針蘸取純培養檢材，垂直刺進半固體培養基的瓊脂柱中間直至管底，置37℃溫箱中培養18～24h，四周擴散生長，使周圍的培養基變成混濁；無運動力的細菌僅能沿穿刺線生長，周圍的培養基仍然保持澄清(圖6—8)。
(2)平板挖溝培養法：預先制備好鮮血瓊脂平板，以無菌手術在平板中央挖去一條lcm寬的瓊脂條，形成一條小溝，放置一條4cm×0.5cm的無菌濾紙橫跨于兩邊培養基上，使之與小溝相垂直。在濾紙條的一頂端接種待檢細菌的純培養物，置37℃溫箱中培養，每天觀察生長情況，直至7天，如接種端的隔溝對邊亦生長同樣細菌，表示該菌有運動力。
[細菌大小的測定]
測量細菌的大小，以微米(μm)為單位，1μm = 1/1000mm。測量細菌大小的裝置稱為測微計，它由接目測微尺和接物測微計兩部分組成。
1．接目測微尺為一個圓形玻片，其中央部刻有50～100個等分小格，小格的長度不定，隨接目鏡與接物鏡的放大倍數不同而異。因此在測量細菌大小之前，須應用接物測微計來確定每一小格的長度。使用時將接目測微尺裝入接目的鏡筒內。
2．接物測微計為一載玻片，在玻片的中央，粘著一圓形小玻片，在其上刻有100個小格，每一小格的長度為10μm，所以全長為1mm(1 000μm)。
3．測量法先用低倍鏡找到接物測微計的小格，然后換油鏡使接目測微尺與接物測微計的小格重疊。借以求出接目測微尺中一個小格的絕對值。
例如接目測定微尺的7小格與接物測微計的一小格重疊時，則接目測微尺一小格的值為7：10：1：X，X=1.43，即一小格為1.43μm。
然后取下接物測微計，放在欲測大腸桿菌(Escherichia coli)染色標本。檢查標本上的細菌的長、寬相當于接目測微計上的幾小格，即為細菌體的大小。
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