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鑒定細胞產生的細胞因子等炎癥介質的分析 | |||
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各種激活類型的細胞可以分泌細胞因子,趨化因子和其他炎癥介質,如穿孔素,粒酶免疫或炎癥反應的一部分。如ELISA和BD?式微珠陣列(CBA)測量整個細胞群所產生的分泌蛋白的方法。與此相反,細胞內流式細胞儀允許于感興趣的細胞群,表型鑒定的個別類型的細胞產生的細胞因子等炎癥介質的分析。
流式細胞儀檢測細胞內使得能夠容易地確定是否由激活的細胞群的細胞因子的產生的結果,產生大量的細胞因子或一個人口眾多的細胞,每個細胞中的細胞因子生產少量的幾個單元格。此外,細胞內流式細胞儀使得能夠容易地測量多種細胞因子的同時,以確定多官能性細胞,細胞內細胞因子染色,也可用于各種各樣的研究,其中包括B和T細胞的分化和可塑性。
通常是由于細胞因子分泌的蛋白質,他們必須先被困在細胞內通過使用蛋白轉運抑制劑。最常用的兩種蛋白質運輸抑制劑:“莫能菌素A(BD GolgiStop)”(BD GolgiPlug)。莫能菌素通過互動與高爾基體跨膜娜+ + / H +運輸,防止蛋白的分泌,而菌素A再分配順/內側的內質網高爾基復合體細胞產生的蛋白質。因此,最好選擇不同運輸蛋白抑制劑細胞因子和物種。見表1。
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CD8 +細胞中的IFN-γ和IL-2產生刺激外周血單核細胞與金黃色葡萄球菌腸毒素B進行6小時的布雷菲德菌素A的存在刺激后,細胞被固定和透性,使用BD Cytofix / Cytoperm的的緩沖液系統。以下的熒光抗體:CD3 FITC,CD4 PERCP循環?5.5,CD8艷紫421,IFN-γ的PE,和IL-2的APC細胞染色。然后洗滌細胞。最后,使用BD FACSVerse的?流式細胞儀分析細胞。
屋宇署已簡化具備完善的工具包,緩沖系統,以及豐富的面板的熒光抗體細胞因子和細胞表面標志物的檢測。多種熒光染料偶聯的表面標志物和細胞因子的抗體。這使得在染色面板設計的靈活性,支持高含量多色流式細胞儀分析,以獲得最珍貴的細胞樣本數據。
BD FastImmune?套件包含熒光抗體測試的雞尾酒,適當的蛋白質運輸抑制劑,兼容的緩沖區,作最佳的準備和詳細的協議,染色,產生細胞因子的細胞從全血的檢測。板載檢測BD FACSVerse流式細胞儀系統進一步簡化這個過程。BD Cytofix / Cytoperm的緩沖已被成千上萬的出版物引用,產生細胞因子的細胞通過流式細胞儀分析。研究人員選擇最適合自己的細胞因子的利息蛋白轉運抑制劑使用BD Cytofix / Cytoperm的緩沖系統,固定,通透和細胞染色,流式細胞儀分析。
抗原特異性IFN-γ產生由巨細胞病毒(CMV)的pp65抗原刺激的CD4 + CD69 + T淋巴細胞雙色流式細胞儀散點圖表明IFN-γ的CD4和CD69的表達被未受刺激的T細胞(左圖),SEB刺激(作為陽性對照,中心板),CMV pp65抗原刺激(右圖)的樣品從兩個捐助者。人類全血刺激菌素A定影之前,透,染色使用BD FastImmune?3色CD4細胞內細胞因子檢測試劑盒的存在。使用BD流式細胞儀FACSVerse和的BD FACSuite?軟件研發試驗獲得的數據。
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