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| 微生物培養基的配制與滅菌需要注意的事項 | |||
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發酵培養基主要是為了供菌種生長、繁殖和合成產物之用。培養基它既要使種子接種后能迅速生長，達到一定的菌絲濃度，又要使長好的菌體能迅速合成需產物。因此，發酵培養基的組成除有菌體生長所必需的元素和化合物外，還要有產物所需的特定元素、前體和促進劑等。但若因生長和生物合成產物需要的總的碳源、氮源、磷源等的濃度太高，或生長和合成兩階段各需的最佳條件要求不同時，則可考慮培養基用分批補料來加以滿足。
操作方法和注意事項如下：加水，打開滅菌鍋蓋，向鍋內加水到水位線。立式消毒鍋最好用已煮開過的水，以便減少水垢在鍋內的積存。注意水要加夠，防止滅菌過程中干鍋。裝料、加蓋，滅菌材料放好后，關閉滅菌器蓋，采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋，使蒸汽鍋密閉，勿使漏氣。排氣，打開排氣口(也叫放氣閥)。用電爐加熱，待水煮沸后，水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出，當有大量蒸汽排出時，維持5min，使鍋內冷空氣完全排凈。標準樣品
升壓、保壓和降壓，當鍋內冷空氣排凈時，即可關閉排氣閥，壓力開始上升。當壓力上升至所需壓力時，控制電壓以維持恒溫，并開始計算滅菌時間，待時間達到要求（一般培養基和器皿滅菌控制在121℃，20min）后，停止加熱，待壓力降至接近“0”時，打開放氣閥。注意不能過早過急地排氣，否則會由于瓶內壓力下降的速度比鍋內慢而造成瓶內液體沖出容器之外。
滅菌后的培養基空白培養，滅菌后的培養基放于37℃培養箱中培養，經24h培養無菌生長，可保存備用；斜面培養基取出后，立即擺成斜面后空白培養；半固體的培養基垂直放置凝成半固體深層瓊脂后，空白培養。
細菌培養的基礎是配制培養基牛肉膏蛋白胨培養基的配方然后再加熱溶解，補足水分，其制作過程包括以下幾個環節：①清潔玻璃器皿 一般用肥皂液煮沸30 min,或用重鉻酸鉀和濃硫酸配制的溶液浸泡數10 min，然后用清水沖洗，晾干后保存備用。②配制液體培養基 a．根據需要配制培養基數量，先在燒杯中注入少量蒸餾水；b．按培養基配方稱量各種成分的原料，依次使之溶解；c．補足需水量；d．如用牛肉膏、蛋白胨配制時，需加熱熔化后溶解；e．加熱后，補足水分即可。③配制固體培養基 在液體培養基里加入一定量的瓊脂，加熱熔化即可。④調pH 先用精密pH試紙測量培養基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養基滴加1 mol/L 的NaOH溶液，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測pH,直到7.4～7.6為止。反之則用1 mol/L的HCl進行調節。⑤過濾分裝 用紗布趁熱過濾，將濾液分裝于試管中，其量約為試管體積的1/5（不要玷污管壁）。⑥加棉塞 培養基分裝完畢以后，在管口上加一個棉塞。棉塞能防止雜菌污染；保證通氣良好，加棉塞時，應使棉塞長度的2/3在試管口內。⑦包扎 每10支試管用線繩捆成一捆，并且在管口外面包上一層牛皮紙，然后用線繩扎好。在每捆試管外掛上標簽，注明培養基名稱、配制日期和制作者姓名。
（2）滅菌 高壓蒸汽滅菌的效果是細菌培養的關鍵。具體操作如下：①打開高壓滅菌鍋，取出里面的滅菌桶，向鍋內加水（最好用開水）水面與底架平齊為宜。②將扎好的試管管口向上，豎放在滅菌桶內，再將滅菌桶放回滅菌鍋。注意：滅菌桶內的物品不能放得太擠，否則會影響滅菌效果。③加蓋，并將排氣軟管插入滅菌桶的排氣槽內。以兩兩對稱的方式，同時旋緊相對的兩個緊固螺栓，以防漏氣。④排出鍋內的冷空氣。⑤當鍋內的壓力上升到規定壓力時，維持壓力20 min，切斷電源。⑥壓力降至0以后，打開排氣閥，排氣完畢打開滅菌鍋。
（3）擱置斜面 如果要制作斜面培養基，將滅菌后的培養基冷卻到50℃，每個試管帶棉塞的一端擱在一根木棒上，使培養基形成斜面，斜面的長度不超過試管總長度的一半。
(4) 檢驗滅菌效果滅菌好的培養基在37℃培養箱中培養24h，檢驗滅菌效果。
培養基配制注意事項：注意營養物質的濃度比和C/N比。如:糖分含量要適合微生物生長才能良好,糖分過多則抑制微生物生長。一般微生物適宜C/N是25:1( 元素C/N的比值,也指培養基中還原糖的含量與粗蛋白質含量的比值)。 |
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