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直接凝集反應是什么舉例介紹 | |||
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細菌或細胞等顆粒性抗原與相應抗體直接反應,出現的凝集現象,主要有玻片法和試管法。玻片法是抗原和相應抗體在玻片上進行的凝集反應,用于定性檢測抗原,如 ABO 血型鑒定、細菌鑒定等。試管法是在試管中倍比稀釋待檢血清,加入已知顆粒性抗原進行的凝集反應,用于定量檢測抗體,如診斷傷寒病的肥達試驗。試管法凝集反應時,抗原抗體結合出現明顯可見反應的最大的抗血清或抗原制劑稀釋度稱為效價,又稱滴度。其原理是細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒性抗原,在適當的電解質參與下可直接與相應抗體結合出現凝集,稱直接凝集反應。參加凝集反應的抗原稱凝集原,抗體則稱為凝集素。www.atcc360.com從方法上來講,有玻片法和試管法兩類。
玻片法凝集主要用于抗原的定性分析,短時間便能觀察結果醫學教|育網搜集整理,一般用來鑒定菌種或分型;也用于人類AB0血型的測定。
試管凝集反應是用定量抗原懸液與一系列遞度倍比稀釋的待檢血清混合,保溫靜置后,根據每管內顆粒凝集的程度,以判斷待檢血清中有無相應抗體及其效價,可以用來協助臨床診斷或流行病原調查研究。醫學教育網整理例如Widal反應、Well-Felix反應、輸血時也常用于受體和供體兩者間的交叉配血試驗。
顆粒抗原與抗體直接結合出現的凝集現象稱為直接凝集反應。
(1)玻片凝集反應
①取清潔玻片一張,用記號筆劃為三格,并注明號碼。無菌操作下,用接種環于第1格、第2格內加1:10稀釋的傷寒桿菌診斷血清1~2滴,第3格加1~2滴生理鹽水。
②無菌操作下,用接種環取傷寒桿菌培養物少許,混于第3格中,再混于第1格中(不能先混第1格再混第3格,因為這樣將使診斷血清混入鹽水而影響對照結果),將細菌與鹽水或血清混合均勻,使呈乳狀液。此時取菌量不可過多,使懸液呈輕度乳濁即可。
③同法取陰性對照菌培養物少許,于第2格內混勻。
④輕輕搖動玻片,經1~2min后肉眼觀察。出現乳白色凝集塊者,即為陽性反應;仍為乳濁液者,即為陰性反應。如結果不夠清晰,可將玻片放于低倍顯微鏡下觀察。
(2)試管凝集反應
試管凝集反應為一種定量試驗,用已知抗原檢查血清中有無特異抗體,并測定其相對含量。方法如下。
①取潔凈小試管14只分兩排排列于試管架上,每排7只依次用蠟筆注明號碼,于每管中分別加入0.5mL生理鹽水。
②在第1排第1管中加入1:10稀釋傷寒H血清0.5mL ,于管內連續吹吸3次,使血清與鹽水充分混合,而后吸出0.5mL注入第2管,同樣予以混勻后吸出0.5mL注入第3管。依次類推,稀釋到第6管,自第6管中吸出0.5mL 棄去。此時,自第1~6管的血清稀釋倍數為1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640。www.atcc360.com第7管不加血清作為對照。
③同法用吸管吸取1:10稀釋傷寒桿菌O血清加入第2排第1管,并依次如上法予以稀釋。
④用移液管吸取傷寒桿菌H菌液,加收第1排各管中每管0.5mL (由鹽水對照管開始,依次由后向前加入),此時血清稀釋倍數又增加了1倍。
⑤同法于第2排各管中加入傷寒桿菌O菌液0.5mL。
⑥將各管振蕩混勻,放37℃水浴箱中2~4h或37℃孵育箱中過夜,次日取出觀察結果。
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