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| 芍藥湯中鹽酸小檗堿的含量測定實驗步驟 | |||
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我們對提取溶媒進行了篩選,比較了水、75%乙醇、95%乙醇、甲醇、鹽酸-甲醇(1∶100),結果鹽酸-甲醇(1∶100)作為溶媒時鹽酸小檗堿含量明顯高于其他溶媒。在對提取溶媒用量、提取方法與提取時間進行篩選上,采用冷浸、回流、超聲波法,經過優選,采用鹽酸-甲醇(1∶100)30 mL超聲提取0.5 h作為樣品的提取條件。本研究對芍藥湯供試品的制備方法進行了優選,采取水煎液、水煎液蒸干甲醇溶解、水煎液制成干膏粉甲醇超聲提取3種方法制備樣品,結果表明,采用水煎液制成干膏粉甲醇超聲提取方法制成的供試品溶液中鹽酸小檗堿的百分含量明顯高于其他方法。
1 儀器與試藥
高效液相色譜儀：Agilent HPLC 1100色譜儀(G1311A四元泵,G1313A自動進樣器,G1316A柱溫箱,G1315B DAD檢測器,HP化學工作站)；Sartorius CP 225D電子天平。
鹽酸小檗堿標準品(中國藥品生物制品檢定所提供,批號110713- 200910,供含量測定用)；方中所用藥材均購自北京豐泰金源藥業有限公司,并由中國中醫科學院中藥研究所胡世林研究員鑒定,均為2005年版《中華人民共和國藥典》(一部)收載的正品。乙腈(色譜純,Fisher 公司)；其他試劑為分析純；水為娃哈哈純凈水。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
色譜柱：Agilent XDB C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動相：乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀水溶液-三乙胺(30∶70∶0.14)；流速：1.0 mL/min；柱溫：25 ℃；檢測波長：345 nm。
2.2 方藥的提取
按處方稱取各味中藥,放入煎煮器中,采用傳統水煎方法提取2次,加水量分別為6、4倍,每次煎煮30 min,合并煎煮液,濃縮,真空干燥成干膏粉,備用。
2.3 對照品溶液的制備
精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量,加鹽酸-甲醇溶液(1∶100)制成每1 mL含70 μg的溶液,即得。
2.4 供試品溶液的制備
取芍藥湯干膏粉(過4號篩)約50 mg,精密稱定,精密加入鹽酸-甲醇溶液(1∶100)30 mL,稱定重量,超聲提取(功率250 W,頻率40 kHz)30 min,放冷,再稱定重量,用鹽酸-甲醇溶液補足減失的重量,搖勻,過濾。濾液濃縮后移置10 mL量瓶中,用鹽酸-甲醇溶液稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,取續濾液,即得。
2.5 線性關系考察
精密吸取上述對照品溶液1、3、5、7、9、11、20 μL進樣分析,測定峰面積。以進樣量對峰面積積分值進行回歸處理,得回歸方程：Y＝2 513.5X－32.56,r＝0.999 9,鹽酸小檗堿在0.07～1.40 μg呈良好的線性關系。
2.6 精密度試驗
精密吸取同一份供試品溶液5 μL,按上述色譜條件進行分析,重復進樣6次,峰面積RSD＝0.33%,表明儀器精密度良好。
2.7 穩定性試驗
取供試品溶液1份,室溫放置,分別于0、1、2、3、4、5、6 h進樣5 μL,按上述色譜條件進行分析,其峰面積RSD＝0.61%,表明供試品溶液在6 h內穩定性良好。
2.8 重復性試驗
按“2.4”項下方法制備供試品溶液6份,分別吸取5 μL,按上述色譜條件進行分析,測定峰面積并計算含量,結果供試品中鹽酸小檗堿平均含量為1.55%,RSD＝1.14%。表明重復性良好。
2.9 加樣回收率試驗
采用加樣回收法。取已知含量的芍藥湯干膏粉約50 mg(約含鹽酸小檗堿0.775 mg),精密稱定,共取6份,分別精密加入鹽酸小檗堿對照品溶液(0.194 mg/mL)4 mL,按“2.4”項下方法制備供試品溶液,分別吸取5 μL,按上述色譜條件進行分析,測定峰面積并計算含量,結果平均回收率為98.63%,RSD＝1.21%。見表1。表1 加樣回收率試驗結果（略）
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