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| 真菌的保藏方法及優(yōu)缺點分析進行優(yōu)劣比較 | |||
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真菌資源的研究利用多以培養(yǎng)物方式保藏，在多數(shù)情況下，真菌資源保藏者一般只監(jiān)測菌株的活性指標，而真菌形態(tài)特征、菌株酶活、致病力、產(chǎn)生次級代謝物的能力等菌株功能特征是否穩(wěn)定卻由于技術(shù)、工作量等原因往往被忽略。真菌的長期保藏要保證菌株的生理性狀和遺傳信息的完整性[1]。本文通過簡述真菌長期保藏過程中一些菌株的形態(tài)、生理生化性狀的變化，旨在引起對真菌長期保藏與監(jiān)測的重視。
目前有很多保藏方法可以適用于真菌的保藏，但大體來可以分為三類：一是讓真菌連續(xù)生長的保藏工藝[2]。這一類的保藏工藝的特點是不斷的將菌株移植在新鮮的培養(yǎng)基上，并在合適的條件下生長，隨后置于一個低溫的環(huán)境中，一般是4-10℃，這類保藏工藝主要包括斜面移植、油管保藏和蒸餾水保藏法等。二是利用干燥環(huán)境保藏菌株的休眠體，如分生孢子、厚垣孢子等，干燥選用的基質(zhì)可以是空氣、硅膠、土壤、沙子等。三是利用抑制菌株代謝活性的辦法達到長期保藏，一般是通過脫水降低細胞內(nèi)水分或低溫冷凍，在此過程中關(guān)鍵環(huán)節(jié)是避免和降低冰晶對細胞造成的傷害，這類保藏工藝包括冷凍干燥法、低溫凍結(jié)和液氮保藏法等。Ryan和Smith對各種保藏方法進行了優(yōu)劣比較[3]。
大多數(shù)真菌資源研究利用基本上是以得到純的培養(yǎng)物為前提，而真菌在培養(yǎng)的過程中，必然離開原來的生長環(huán)境，營養(yǎng)、環(huán)境條件發(fā)生改變，這是真菌發(fā)生性狀改變的重要因子，真菌培養(yǎng)物長期保藏就會不可避免的發(fā)生性狀變化。難以培養(yǎng)的真菌以及一些專性寄生真菌不能在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)生長，其主要原因是在目前認知條件下，不能夠提供此類微生物生長所需的必要條件。此外，絲狀真菌保藏一般采用保藏真菌的孢子、菌絲，其中保藏真菌的孢子一般周期較長，活性較為穩(wěn)定，但無論在無性階段產(chǎn)生分生孢子還是有性階段產(chǎn)生的性孢子，都是經(jīng)過基因重組階段，這就增加了保藏菌株發(fā)生變異的可能性[4]。真菌在分離、培養(yǎng)、保藏的工藝處理、長期保藏、保藏后復活等環(huán)節(jié)上，都有可能造成真菌細胞發(fā)生損壞或基因組信息缺失，從而引起性狀發(fā)生變化。
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