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		如何用甘油保存菌種的基本要求方法

如何用甘油保存菌種的基本要求方法

　　1. 20%甘油保存菌種是指甘油:菌液=20:80,800ul菌液加200u滅菌l甘油后的甘油后,充分混勻后,-70度保藏.(注意甘油要慢慢吸)

　　2. 將一般細(xì)菌的菌種純化后接種于普通肉湯管，4～6h增菌后，加入適量甘油一生理鹽水保存液，-20℃冰箱保存；鏈球菌屬和奈瑟氏菌屬的菌株純化后接種于血清肉湯管，在5％～10％CO2中經(jīng)8～10h增菌后，加入適量保存液，80℃低溫冰箱保存；真菌菌種純化后直接取菌洗入肉湯，不做培養(yǎng)，加入保存液后，-20℃冰箱保存。結(jié)果在連續(xù)3年實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，各菌種保存效果良好，且其形態(tài)結(jié)構(gòu)、染色特性、生化反應(yīng)等與標(biāo)準(zhǔn)株相符。結(jié)論使用甘油生理鹽水保存法來(lái)保存菌種，各菌種保存時(shí)間長(zhǎng)，方法簡(jiǎn)便，特別是使鏈球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般實(shí)驗(yàn)室得以保存。

　　3. 常用的是終濃度 10-30% 的甘油。由于純甘油十分粘稠，很難定量，一般配成終濃度 50% 的水溶液，高壓滅菌后室溫保存即可。使用時(shí)按 50% 甘油:菌液 = 1:1 混合均勻，然后迅速凍結(jié)。

　　A. 先把甘油稀釋成50%，然后滅菌這樣20%的終濃度用400微的菌體加600微的50%甘油混合不就可以啦純的甘油太粘稠啦，用槍不好吸的

　　B 終濃度15%。甘油配成80%的濃度，到時(shí)候加800微升菌體，200微升甘油就好。簡(jiǎn)單的就在原來(lái)的培養(yǎng)基，如LB，或生理鹽水中加甘油，終濃度在20%左右，懸浮沉淀后裝小管扔冰箱凍起來(lái)就可以了。但時(shí)間不能太長(zhǎng)，不要超過(guò)2~3個(gè)月，時(shí)間長(zhǎng)了要重新活化、篩選。

　　甘油和水是互溶的，根本不是什么密封作用！甘油是為了防止冷凍結(jié)晶破壞細(xì)胞

　　冷凍干燥保藏法是菌種保藏最有效的方法之一冷凍干燥法是國(guó)內(nèi)外一致認(rèn)為比較理想的菌種保藏方法。冷凍真空干燥保藏法又稱(chēng)冷凍干燥保藏法，簡(jiǎn)稱(chēng)凍干法。它通常是用保護(hù)劑制備擬保藏菌種的細(xì)胞懸液或孢子懸液于安瓿管中，再在低溫下快速將含菌樣凍結(jié)，并減壓抽真空，使水升華將樣品脫水干燥，形成完全干燥的固體菌塊。并在真空條件下立即融封，造成無(wú)氧真空環(huán)境，最后置于低溫下，使微生物處于休眠狀態(tài)，而得以長(zhǎng)期保藏。常用的保護(hù)劑有脫脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物質(zhì)。?由于此法同時(shí)具備低溫、干燥、缺氧的菌種保藏條件，因此保藏期長(zhǎng)，一般達(dá)5～15年，存活率高，變異率低，是目前被廣泛采用的一種較理想的保藏方法。除不產(chǎn)孢子的絲狀真菌不宜用此法外，其他大多數(shù)微生物如病毒、細(xì)菌、放線菌、酵母菌、絲狀真菌等均可采用這種保藏方法。?保藏菌種需用時(shí)，可在無(wú)菌環(huán)境下開(kāi)啟安瓿管，將無(wú)菌的培養(yǎng)基注入安瓿管中，固體菌塊溶解后，搖勻復(fù)水，然后將其接種于適宜該菌種生長(zhǎng)的斜面上適溫培養(yǎng)即可。?

　　該法操作比較煩瑣，技術(shù)要求較高，且需要凍干機(jī)等設(shè)備。不適合酷友頻繁的求助菌種。我們實(shí)驗(yàn)室保藏菌種，不管是細(xì)菌，放線菌還是霉菌和酵母，我們都是用的甘油管保藏。就是劃斜面得到單菌落，將單菌落置于液體培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，在EP管中保存，菌液與甘油體積比為1：1，甘油要滅菌的。-20攝氏度保存即可。我們的菌種有保存七八年的依然能用。方便快捷。

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